شناسايي اهداف ژني مشترك miR326 و جينجرنون A در تيمار تركيبي سرطان خون لنفوبلاستي حاد نوع B

چكيده لوسمي لنفوبلاستي حاد نوعB (B-ALL) يكي از بدخيمي‌هاي شايع خوني است كه با اختلال در مسيرهاي پيام‌رساني مرتبط با بقا و تكثير سلولي همراه مي‌باشد. درمانهاي تركيبي، همواره به‌عنوان يكي از روش‌هاي نوين در درمان سرطان، با بهبود اثربخشي آن مورد توجه قرار گرفته اند. هدف از اين پژوهش، شناسايي اهداف ژني مشترك miR-326 و جينجرنون A در بيماري ALL و نيز بررسي اثر تيمار تركيبي آنها بر رده سلولي B-ALL بود. به اين منظور، ابتدا با بررسي مقالات علمي و پايگاه‌هاي داده بيوانفورماتيكي، اهداف ژني miR-326، اهداف مولكولي جينجرنون A و ژن‌هاي مرتبط با بيماري ALL استخراج و فصل مشترك آن‌ها شناسايي شد. پس از تحليل غني‌سازي مسيرهاي پيام‌رساني مرتبط، مسير PI3K/AKT معرفي شد. در ادامه براي بررسي توان جينجرنون A بر مهار پروتئين هاي مسير PI3K/AKT ، داكينگ مولكولي انجام شد. براي بررسي تجربي نتايج داكينگ مولكولي، تيمار رده سلولي B-ALL (RN95) با miR-326 و جينجرنون A به‌صورت منفرد و تركيبي انجام گرفت. در ابتدا 610×2 سلول با 250 نانومولار miR-326 ترنسفكت شد. پس از 36 ساعت، سلول‌هاي ترنسفكت شده با 6 ميكرومولار جينجرنون A تيمار شدند. آزمون وسترن بلات پس از گذشت 72 ساعت انجام شد. نتايج داكينگ مولكولي نشان داد كه جينجرنون A با انرژي اتصال ميانگين kcal/mol 7.39- به جايگاه فعال ايزوفرم‌هاي PI3K و با انرژي اتصال 7.28- به پروتئين AKT1 متصل مي‌شود داراي پتانسيل مهار اين پروتئين‌ها مي باشد. همچنين ارزيابي سطح فسفريلاسيون فعال‌كننده AKT در جايگاه‌هاي Ser473 و Thr308 نشان داد كه ميزان فسفريلاسيون AKT در تيمار تركيبي نسبت به هر يك از تيمارهاي تك‌عاملي و كنترل كمتر مي باشد (p<‎0.05). نتايج اين پژوهش نشان داد كه miR-326 و جينجرنون A به‌صورت هم‌افزا، فعاليت مسير PI3K/AKT را در سلول‌هاي B-ALL مهار مي‌كنند. اين رويكرد درماني تركيبي مي‌تواند به‌عنوان يك راهكار هدفمند و نوين در درمان اين بيماري مد نظر قرار گيرد.

B-cell acute lymphoblastic leukemia , miR-326 , Gingerone A , shared gene targets , PI3K/AKT pathway , combination therapy , , RN95

Identification of Common Genes Targeted by miR-326 an‎d Gingerenone A in B cell-Acute Lymphoblastic Leukemia combined treatment

زيست شناسي سلولي مولكولي و ميكروبيولوژي

B-cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) is one of the most common hematological malignancies an‎d is characterized by dysregulation of signaling pathways involved in cell survival an‎d proliferation. Combination therapies have increasingly attracted attention in cancer treatment due to their ability to improve therapeutic efficacy. The aim of this study was to identify shared gene targets of miR-326 an‎d Gingerone A in ALL an‎d to eva‎luate the effect of their combined treatment in a B-ALL cell line. To this end, gene targets of miR-326, molecular targets of Gingerone A, an‎d ALL-associated genes were first collected using scientific literature an‎d bioinformatics databases, an‎d their common targets were identified. Pathway enrichment analysis identified PI3K/AKT as a key shared signaling pathway. Molecular docking analysis revealed that Gingerone A binds to the active sites of PI3K isoforms with a mean binding energy of -7.39 kcal/mol an‎d to AKT1 with a binding energy of -7.28 kcal/mol, suggesting inhibitory potential against key components of this pathway. To experimentally validate the docking results, the B-ALL cell line RN95 was treated with miR-326 an‎d Gingerone A individually an‎d in combination. Initially, cells were transfected with 250 nM miR-326, followed by treatment with 6 µM Gingerone A after 36 hours. Western blot analysis performed 72 hours after treatment demonstrated that phosphorylation levels of AKT at Ser473 an‎d Thr308 were reduced in all treated groups, with the most pronounced decrease observed in the combined treatment compared to single treatments an‎d the control group (p <‎ 0.05). Overall, these findings indicate that miR-326 an‎d Gingerone A act synergistically to suppress PI3K/AKT pathway activity in B-ALL cells. This combined therapeutic strategy may represent a promising targeted therapeutic approach for the treatment of B-ALL.

4

158453