ارزيابي نقش جينجرنونA بر مسير پيام‌رساني PI3K/AKT/mTOR در رده‌ي سلولي T-ALL كودكان

لوسمي لنفوبلاستي حاد (ALL) از شايع‌ترين بدخيمي‌ها در سنين كودكي مي‌باشد و فنوتيپ نوع T اين بيماري داراي پروگنوز منفي است. درمان هدفمند، يكي از روش درماني نويني است كه باشناسايي و مسدود كردن مسيرهاي اختصاصي فعال در سلول‌هاي سرطاني، سعي در كاهش عوارض جانبي داروها و افزايش اثربخشي درمان دارد. هدف اين پژوهش مطالعه‌ي اثر جينجرنون A، يكي از مشتقات زنجبيل، بر مسير پيام رساني PI3K/AKT/mTOR/S6K1 در رده سلولي CCRF-CEM به عنوان يك درمان هدفمند براي T-ALL بود. انتخاب اين مسير پيام رساني اهميت آن در رشد، بقا، تهاجم و متاستازT-ALL، بود. براين اساس، تعداد 106 ×2.4سلول‌ رده CCRF-CEM به مدت 72 ساعت با غلظت‌هاي 10 و 40 ميكرومولار جينجرنون Aمحلول در0.04مولار DMSO تيمار شدند. سلولهاي تيمار شده پس از 72 ساعت جمع آوري شده و آزمون وسترن‌بلات با استفاده از آنتي‌بادي‌هاي مونوكلونال اوليه موشي ضد p-mTOR و mTOR انساني(با رقت1:200) و آنتي‌بادي‌‌هاي پلي‌كلونال اوليه خرگوشي ضد p-S6K1 و S6K1 انساني(با رقت 1:200) جهت بررسي ميزان فسفريلاسيونmTOR و S6K1 انجام شد. نتايج اين آزمايش حاكي از كاهش فسفريلاسيون پروتئين‌ mTOR پس از تيمار با 10 و 40 ميكرومولار جينجرنون A در مقايسه با سلولهاي كنترل بود (به ترتيب 0.04 ± 0.81 و 0.04 ± 0.34 (Optical density unit)ODU)(P<‎0.01 و P<‎0.001). همچنين نتايج حاكي از كاهش فسفريلاسيون پروتئين‌ S6K1 پس از تيمار با 10 و 40 ميكرومولار جينجرنون A در مقايسه با سلولهاي كنترل بود (به ترتيب 0.02 ± 0.92و 0.04 ± 0.71ODU) (P<‎0.05 و P<‎0.001). مقادير ارائه شده با سطوح غير فسفريله پروتئين‌هاي مذكور و بتا اكتين مقايسه شد.اين پژوهش اولين مطالعه‌اي است كه مكانيسم اثر ضد سرطاني جينجرنونA بر رده‌ي سلولي T-ALL (CCRF-CEM) را با توجه به مسير پيام‌رساني PI3K/AKT/mTOR/S6K1 نشان مي دهد. نتايج اين تحقيق گامي مثبت در جهت شناخت پاتوفيزيولوژي T-ALL و بهبود راهكارهاي درماني اين بيماري است.

Acute Lymphoblastic Leukemia , Gingerenone A , PI3K/AKT/mTOR signaling pathway , CCRF-CEM cell line

Investigating the role of Gingerenone A in the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway in pediatric T-ALL cell line.

زيست شناسي سلولي مولكولي و ميكروبيولوژي

Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a preva‎lent childhood malignancy, with the T-cell phenotype exhibiting a poor prognosis. Targeted therapy, a novel treatment modality, aims to reduce adverse effects an‎d enhance efficacy by identifying an‎d blocking specific signaling pathways activated in cancer cells. This study investigated the effect of Gingerenone A, a ginger derivative, on the PI3K/AKT/mTOR/S6K1 signaling pathway in the CCRF-CEM cell line as a targeted therapy for T-ALL. This pathway was selec‎ted due to its crucial role in T-ALL growth, survival, invasion, an‎d metastasis. 2.4 × 10⁶ CCRF-CEM cells were treated with 10 an‎d 40 µM Gingerenone A (dissolved in 0.04 M DMSO) for 72 hours. Following treatment, cells were harvested, an‎d Western blot analysis was performed using mouse anti-human p-mTOR an‎d mTOR monoclonal primary antibodies (1:200 dilution) an‎d rabbit anti-human p-S6K1 an‎d S6K1 polyclonal primary antibodies (1:200 dilution) to assess mTOR an‎d S6K1 phosphorylation levels.Results demonstrated a significant decrease in mTOR phosphorylation following treatment with 10 an‎d 40 µM Gingerenone A compared to the control group (0.81 ± 0.04 an‎d 0.34 ± 0.04 ODU, respectively) (P <‎ 0.01 an‎d P <‎ 0.001). Similarly, S6K1 phosphorylation was significantly reduced after treatment with 10 an‎d 40 µM Gingerenone A compared to the control group (0.92 ± 0.02 an‎d 0.71 ± 0.04 ODU, respectively) (P <‎ 0.05 an‎d P <‎ 0.001). The presented values were normalized to the levels of unphosphorylated proteins an‎d β-actin. This research represents the first study to elucidate the anticancer mechanism of Gingerenone A on the T-ALL cell line (CCRF-CEM) via the PI3K/AKT/mTOR/S6K1 signaling pathway. The findings contribute significantly to our understan‎ding of T-ALL pathophysiology an‎d offer promising avenues for improved therapeutic strategies.

4