-
شماره ركورد
24266
-
شماره راهنما
BIO2 1046
-
نويسنده
امام، طاهره
-
عنوان
بيان و خالصسازي آنزيم ترمينال دئوكسي نوكلئوتيديل ترانسفراز (TdT) نوتركيب و ارزيابي اثر گلايسين بر فعاليت آن
-
مقطع تحصيلي
كارشناسي ارشد
-
رشته تحصيلي
بيوشيمي
-
دانشكده
علوم و فناوريهاي زيستي
-
تاريخ دفاع
1403/11/3
-
صفحه شمار
68 ص.
-
استاد راهنما
دكتر رحمان امام زاده
-
استاد مشاور
دكتر فاطمه جوادي زرنقي
-
كليدواژه فارسي
آنزيم ترمينال دئوكسي نوكلئوتيديل ترانسفراز (TdT) , گليسين , فعاليت آنزيم , بيان , خالص سازيز
-
چكيده فارسي
آنزيم ترمينال دئوكسي نوكلئوتيديل ترانسفراز (TdT)، يك DNA پليمراز متعلق به خانواده پليمراز pol X است. اين آنزيم برخلاف ساير DNA پليمرازهاي خانواده نوكلئوتيديل ترانسفرازها، ميتواند بدون نياز به رشته¬ي الگو اتصال نوكلئوتيدهاي طبيعي و غيرطبيعي را در انتهاي ʹ3 هيدروكسي DNA تكرشتهاي، دو رشتهاي يا RNA، كاتاليز كند. اين مزيت منحصربهفرد به طور گسترده¬اي در ساخت حسگرهاي زيستي استفاده ميشود. TdT همانند تمام پليمرازها به حضور يون فلزي براي كاتاليز واكنش انتقال فسفريل نياز دارد و مي¬تواند از يونهاي فلزي مختلفي مانند Co2+، Mn2+، +Zn2 و +Mg2 استفاده كند. بهدليل كاربردهاي گستردهاي كه آنزيم ترمينال دئوكسي نوكلئوتيديل ترانسفراز از جمله استفاده در TUNEL و روش ايمونوفلورسانس، ساخت بيوسنسورها و پلي نوكلئوتيدها، توسعۀ آپتامرها و ساختارهاي نانو DNA دارد؛ مطالعه بر روي اين آنزيم از اهميت بسيار زيادي برخوردار است. در اين پژوهش، اثر اسموليت گليسين بر فعاليت آنزيم TdT بررسي شد. بدين منظور پس از بيان و خالص¬سازي آنزيم و تأييد صحت بيان آن به روش SDS-PAGE، فعاليت آنزيم با استفاده از گسترش طول يك توالي تكرشتهاي و ساخت رشتهاي اتفاقي پلي نوكلئوتيدي در حضور غلظتهاي مختلف گلايسين و همچنين در pHهاي مختلف مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج اين مطالعه نشان داد كه آنزيم TdT خالصشده در pHهاي 5 تا 8 فعاليت قابل قبولي دارد. همچنين با وجود اينكه گليسين در دامنه غلظتهاي M 025/0 تا M 1/0 اثر معنيداري بر فعاليت آنزيم نداشت، در غلظتهاي بالاتر از 1/0 مولار بهطور معنيداري باعث كاهش فعاليت آنزيم شد.
-
كليدواژه لاتين
Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) , glycine , enzyme activity , expression , purification
-
عنوان لاتين
Expression and purification of recombinant deoxynucleotidyl transferase (TdT) enzyme and evaluation of the effect of glycine on its activity
-
گروه آموزشي
زيست شناسي سلولي مولكولي و ميكروبيولوژي
-
چكيده لاتين
Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) is a DNA polymerase belonging to the pol X polymerase family. Unlike other DNA polymerases in the nucleotidyl transferase family, this enzyme can catalyze the addition of natural and unnatural nucleotides to the 3ʹ hydroxyl end of single-stranded, double-stranded DNA, or RNA without a template strand. This unique advantage is widely utilized in the construction of biosensors. Like all polymerases, TdT requires the presence of a metal ion to catalyze the phosphorolysis reaction and can utilize various metal ions such as Co2+, Mn2+, Zn2+, and Mg2+. Due to the extensive applications of terminal deoxynucleotidyl transferase, including its use in TUNEL and immunofluorescence methods, the construction of biosensors and polynucleotides, the development of aptamers, and DNA nanostructures, studying this enzyme is of great importance. In this research, the effect of the stabilizing osmolyte glycine on the activity of TdT was investigated. To this end, after expressing and purifying the enzyme and confirming the expression accuracy using SDS-PAGE, the enzyme activity was evaluated by extending the length of a single-stranded sequence and constructing a random polynucleotide strand in the presence of various concentrations of glycine and at different pH levels. The results of this study showed that purified TdT enzyme has acceptable activity at pH 5 to 8. Also, although glycine had no significant effect on enzyme activity in the concentration range of 0.025 M to 0.1 M, it significantly reduced enzyme activity at concentrations higher than 0.1 M.
-
تعداد فصل ها
4
-
لينک به اين مدرک :