-
شماره ركورد
24115
-
شماره راهنما
BIOTECH2 366
-
نويسنده
رياحي روحي، ليلا
-
عنوان
تشخيص جهش هاي حذفي Hb Lepore و Sicilian Hb در ژن بتاگلوبين با روش تكثير هم دما
-
مقطع تحصيلي
كارشناسي ارشد
-
رشته تحصيلي
ريززيست فناوري
-
دانشكده
علوم و فناوريهاي زيستي
-
تاريخ دفاع
1403/08/26
-
صفحه شمار
84 ص.
-
استاد راهنما
محسن گلابي
-
استاد مشاور
منصور صالحي
-
كليدواژه فارسي
تكثير هم دما به واسطه حلقه , هموگلبين لپور , هموگلبين سيسلين , جهش حذفي , ژن بتا گلوبين , بتاتالاسمي , نانوذره سيليكا , نانوذره زئوليت
-
چكيده فارسي
مقدمه:تالاسمي يكي از شايع¬ترين اختلال ژنتيكي تك ژني مي¬باشد، كه در اثر نقض در سنتز زنجيره¬هاي مولكول هموگلبين به وجود مي¬آيد و شامل دو نوع آلفا و بتا مي¬باشد. بتا تالاسمي يكي از انواع تالاسمي است كه به دليل جهش در ژن بتا گلوبين كه در توليد زنجيره بتا مولكول هموگلوبين نقش دارد، ايجاد مي¬شود. اين ژن بر روي كروموزوم 11 قرار دارد و به صورت اتوزومي مغلوب به ارث مي¬رسد.
بيماري تالاسمي ميتواند در اثر جهشهاي حذفي بزرگ كه بر روي مجموعه ژني بتاگلوبين قرارگرفتهاند ،ايجاد شود.جهشهاي حذفي متنوعي در جمعيتهاي مختلف شناسايي شده¬است. دو جهش حذفي هموگلبين لپور و سيسيلين ازجمله جهشهاي حذفي بيماري بتا تالاسمي ميباشند .هموگلبين لپور ،گروه كوچكي از هموگلبينهاي غير طبيعي ساختاري است كه از¬همجوشي بين انتهاي ʹ5 ژن دلتا گلوبين و انتهايʹ3 ژن بتاگلوبين به دليل كراس اور يا تبديل ژن در طول ميوز ايجاد ميشود و منجر به حذف 4/7 كيلو جفت باز بين ژن هاي دلتا و بتا گلوبين ميشود.جهش حذفي هموگلبين سيسيلين ، يك حذف 4/13 كيلو جفت باز است كه از ناحيه IVS II ژن دلتا گلوبين از عنصر L1 تا سمتʹ3 ژن بتا گلوبين حذف ميشود. روشهاي مولكولي مختلفي براي تشخيص جهش نقطه¬اي در بتا تالاسمي استفاده شده¬است.در حال حاضر بسياري از روش¬هاي مبتني بر PCR وجود دارد كه ميتوانند براي شناسايي جهشهاي حذفي ژن گلوبين استفاده شوند، از جمله Gap_PCR , Real-timePCR, MLPA .
روش تحقيق:در اين طرح پژوهشي براي جهشهاي حذفي در ژن هموگلبين لپور وسيسيلين به طور جداگانه مجموعه آغازگر طراحي شد. حساسيت و دقت آغازگرهاي اختصاصي طراحي شده با انجام آزمايش تكثير هم دما توسط دستگاه ترمال سايكلر در زمان واقعي اندازهگيري شد و نتايج با ژل الكتروفورز مورد تاييد قرار گرفت. قابليت انجام آزمون سريع با به كارگيري رنگ SYTO24 بررسي شد. تاثير نانو ذرات سيليكا بدون شكل و نانوذرهي زئوليت در افزايش پايداري مخلوط واكنش بررسي شد.
نتايج و بحث:استفاده از روش تكثير هم دما به واسطه حلقه براي شناسايي جهشهاي حذفي ژن هموگلبين لپور و سيسيلين موفقيت آميز بود. تاثير مثبت نانوذرات سيليكا در افزايش پايداري مخلوط واكنش مشاهده شد.
-
كليدواژه لاتين
Isothermal Amplification , Hb Lepore , Hb Sicilian , Deletion mutation , Beta globin gene , Beta thalassemia , silica nanoparticles , zeolite nanoparticles
-
عنوان لاتين
Detection of Hb Lepore and Hb Sicilian deletions in the β-globin gene using the isothermal amplification method
-
گروه آموزشي
زيست فناوري
-
چكيده لاتين
Introduction: Thalassemia is one of the most common single-gene genetic disorders, caused by defects in the synthesis of hemoglobin molecule chains, and includes two types: alpha and beta. Beta thalassemia is a type of thalassemia caused by mutations in the beta-globin gene, which plays a role in the production of the beta chain of the hemoglobin molecule. This gene is located on chromosome 11 and is inherited in an autosomal recessive manner. Thalassemia can be caused by large deletion mutations located on the beta-globin gene cluster. Various deletion mutations have been identified in different populations. Two deletion mutations, Hemoglobin Lepore and Sicilian, are among the deletion mutations of beta thalassemia. Hemoglobin Lepore is a small group of structurally abnormal hemoglobins resulting from the fusion between the 5’ end of the delta-globin gene and the 3’ end of the beta-globin gene due to crossover or gene conversion during meiosis, leading to a 4.7 kb deletion between the delta and beta-globin genes. The Sicilian deletion mutation is a 13.4 kb deletion from the IVS II region of the delta-globin gene from the L1 element to the 3’ end of the beta-globin gene. Various molecular methods have been used to detect point mutations in beta thalassemia. Currently, many PCR-based methods can be used to identify deletion mutations in the globin gene, including Gap-PCR, Real-time PCR, and MLPA
Methods: In this research project, primer sets were separately designed for deletion mutations in the Hemoglobin Lepore and Sicilian genes. The sensitivity and specificity of the designed specific primers were measured by performing isothermal amplification tests using a real-time thermal cycler, and the results were confirmed by gel electrophoresis. The feasibility of rapid testing using SYTO dye was evaluated. The effect of amorphous silica nanoparticles and zeolite nanoparticles on increasing the stability of the reaction mixture was investigated.
Results and Discussion: The use of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of deletion mutations in the Hemoglobin Lepore and Sicilian genes was successful. The positive effect of silica nanoparticles in increasing the stability of the reaction mixture was observed.
-
تعداد فصل ها
4
-
استاد راهنماي خارج از دانشگاه
سيد حسين جلالي
-
لينک به اين مدرک :