شماره ركورد
23623
شماره راهنما
BIO3 191
عنوان
جداسازي اگزوزومها از نمونه خون محيطي كودكان مبتلا به لوسمي لنفوبلاستي حاد و شناسايي نشانگر زيستي مرتبط با بيماري در اگزوزومهاي استخراجشده
مقطع تحصيلي
دكتري
رشته تحصيلي
زيست شناسي سلولي و مولكولي
دانشكده
علوم و فناوريهاي زيستي
تاريخ دفاع
1403/3/2
صفحه شمار
96 ص.
استاد راهنما
دكتر سهيلا رهگذر
استاد مشاور
دكتر فيكرتين شاهين
كليدواژه فارسي
لوسمي لنفوبلاستي حاد، اگزوزوم، miR-326، تشخيص، پيشآگهي، زندهماني، درمان
چكيده فارسي
چكيده
مقدمه: لوسمي لنفوبلاستي حاد (ALL)، شايعترين نوع بدخيمي در كودكان است. عليرغم تمامي موفقيتهاي موجود، تشخيص زودهنگام و درمان مؤثر اين بدخيمي با چالشهاي زيادي روبروست. miR-326 در مطالعات انجام شده بهعنوان يك نشانگر سركوبگر تومور در ALL شناسايي شده است. در اين پژوهش نقش miR-326 اگزوزومي موجود در پلاسماي بيماران مبتلا به ALL بهعنوان يك نشانگر زيستي مورد بررسي قرار گرفت؛ همچنين، تأثير اگزوزومهاي حامل اين ميكرو RNA بر سلولهاي هدف ارزيابي شد. اگزوزومهاي ترشح شده در محيط كشت ردههاي سلولي B-ALL و پلاسماي اين بيماران به روش اولتراسانترفيوژ، فيلتراسيون و كيت تجاري استخراج شدند. وزيكولهاي استخراج شده با استفاده از آناليز رديابي نانوذرات، ميكروسكوپ الكتروني عبوري، ميكروسكوپ الكتروني روبشي، ايمونوبلاتينگ موئينهايي و وسترنبلات بهعنوان اگزوزوم تعيين هويت شدند. بيان miR-326 در اگزوزومهاي استخراج شده با استفاده از روش RT-qPCR سنجيده شد. بيان miR-326 اگزوزومي در دو رده سلولي B-ALL و نيز نمونهي پلاسماي بيماران مبتلا به B-ALL و افراد كنترل اندازهگيري و با استفاده از نرمافزار Graphpad-prism با يكديگر مقايسه شد. اثر اگزوزومهاي حاوي مقادير بياني بالاي miR-326، اعم از اگزوزومهاي برگرفته از ردههاي سلولي و پلاسماي بيماران مقاوم به درمان، بر زنده ماني سلولهاي هدف به روش MTT سنجيده شد. جهت تأييد ورود اگزوزومها به درون سلول هدف، اگزوزومها با DII رنگآميزي و به¬وسيله ميكروسكوپ فلئورسنس مشاهده شد. بررسي اندازه، غلظت، ماهيت، مرفولوژي و بيان ماركرهاي اگزوزومي در نمونههاي استخراجشده، ماهيت اگزوزومها را تأييد نمود. miR-326 اگزوزومي در ردهي سلولي RN95 و بيماران مبتلا به ALL، به ترتيب، بيان بيشتري را در مقايسه با ردهي سلولي Nalm6 و افراد كنترل نشان داد. همچنين، مقادير بياني بالاتري از miR-326 در بيماران مقاوم نسبت به بيماران حساس به درمان مشاهده شد. نتايج آزمون ROC ارزش miR-326 اگزوزومي را در B-ALL بهعنوان يك نشانگر تشخيصي و پيشآگهي تاييد كرد. تيمار سلولهاي هدف شامل بلاستهاي برگرفته از كودك مبتلا به لوسمي لنفوبلاستي حاد و ردههاي سلولي B-ALL با اگزوزومهاي حاوي مقادير بياني بالاي miR-326 (1.56 ) ارزش درماني اين ميكروRNAي اگزوزمي را تأييد نمود و نتايج بدست آمده از ميكروسكوپ فلئورسنس مبين ورود اگزوزومها به داخل سلولهاي هدف بود.
كليدواژه لاتين
Acute lymphoblastic leukemia, drug resistance, exosomes, miR-326, biomarker, diagnosis, treatment
عنوان لاتين
Purification of exosomes from the peripheral blood of patients with pediatric acute lymphoblastic leukemia and identification of the diseases related biomarker in the extracted exosomes
گروه آموزشي
زيست شناسي سلولي مولكولي و ميكروبيولوژي
چكيده لاتين
Abstract
Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a cancer with high incidence rate in pediatrics and drug resistance is a major clinical concern for ALL treatment. The current study was designed to evaluate the role of exosomal miR-326 in diagnosis and treatment of children with B-ALL. Exosomes were isolated from plasma samples of 30 patients and B-ALL cell lines followed by characterization, using nanoparticle tracking analysis, immunoblotting assay and electron microscopy. qPCR showed significantly increased levels of miR-326 in patients exosomes compared with non-cancer controls (P <0.05, AUC = 0.7500). Moreover, a comparison between the sensitive and drug resistant patients revealed a prognostic value for the exosomal miR326 (P <0.05, AUC = 0.7755). Co-culture studies on drug resistant patient primary cells and B-ALL cell lines suggested that exosomes with high miR-326 level act as vehicles for reducing cells viability. B-ALL cell line transfection with naked miR-326 mimic confirmed the results, and fluorescence microscopy validated uptake and internalization of exosomes by target cells. The novel introduced features of the exosomal miR-326 address a non-invasive way of diagnosing primary drug resistance in pediatric ALL and advocates a novel therapeutic strategy for this cancer.
تعداد فصل ها
4
فهرست مطالب pdf
33040
نويسنده